免疫組化常見(jiàn)問(wèn)題分析

1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過(guò)深

一抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間

孵育溫度過(guò)高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色

石蠟切片脫蠟不干凈——延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間

蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間

組織富含內(nèi)源性生物素與過(guò)氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無(wú)染色

一抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間

組織中無(wú)目的抗原的表達(dá)

一抗種屬來(lái)源與二抗不匹配

注意事項(xiàng)

切片脫蠟和水化要充分，加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，同時(shí)防止干片。

一抗的沖洗原則：?jiǎn)为?dú)沖洗，防交叉反應(yīng)污染；溫柔沖洗，防止切片脫落；推薦浸洗方式。

有條件的話最好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。